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植物组织原位杂交电话「思特进」

发布者:武汉思特进科技发展有限公司  时间:2022-1-13 






原位杂交;原位杂交in situ hybridization将标记的-探针与细胞或组织中的-进行杂交,称为原位杂交!

使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落100-200进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。




多种探针标记检测系统

基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。

荧光标记检测常为直接探针标记方法,如在dutp/utp/ddutp上连接fluorescein后进行-标记。由于标记在-上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验,以及荧光分子易于衰减,其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。






原位杂交中探针的选择

dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短,因此避免了探针内部退火的问题,在杂交时的渗透能力也---,探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度,通常300-1000bp左右,能覆盖到较长片段的靶-序列,增加检测的灵敏度。







惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍,而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加---100倍。而短探针不需用促进剂,因其复杂度低和分子量小 ,短探针本身的杂交率就高 。---葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。这是一种多聚胺,平均分子量为500 000。另一种常见的促进剂是---peg,peg分子量小6000~8000、粘度低、价格低廉,但它不能完成取代---葡聚糖。在某些条件下5%~10%---葡聚糖效果较好,若用5%~10%peg则可产生---的本底。因此,使用促进剂时有---优化条件。




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