植物组织原位杂交电话「思特进」
原位杂交;原位杂交in situ hybridization将标记的-探针与细胞或组织中的-进行杂交,称为原位杂交!
使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。
以菌落原位杂交为例:
多种探针标记检测系统
基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。
荧光标记检测常为直接探针标记方法,如在dutp/utp/ddutp上连接fluorescein后进行-标记。由于标记在-上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验,以及荧光分子易于衰减,其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。
原位杂交中探针的选择
dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短,因此避免了探针内部退火的问题,在杂交时的渗透能力也---,探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度,通常300-1000bp左右,能覆盖到较长片段的靶-序列,增加检测的灵敏度。
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