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哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。

将外源dna 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及zui近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以-作为载体,通过-感0染的方式将外源dna 导入到细胞中, 其中以逆转录-及腺-转染系统zui为常用。

1. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象，可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。

2. 将细胞板移至 37oc/5% co2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。

3. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

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使用方法

1. 将新鲜-的 bhk-21 细胞接种到 24 孔细胞板中，每孔 1~2×105细胞，1ml 完全培养基。备注：可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无需 18~24 小时的等候时间。

2. 将 2μg 质粒 dna 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注：质粒 dna 和转染试剂的zui适用量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。

4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。

5. 将细胞板移至 37oc/5% co2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。

6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。