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随着基因组测序、分子生物学检测手段的快速发展,pcr和荧光定量pcr实验,正在越来越多的实验室应用。然而,pcr作为一种高灵敏度的检测手段,pcr的实验结果也容易被各种无关的外源性dna或rna所干扰。
pcr实验室中,很容易发生dna的交叉污染,污染通常来自于离心管、移液器和其他试验设备产生的dna气溶胶,或dna溶液污染桌面,或吸样枪不慎将样品或模板---吸入枪内。据估算,一个气溶胶颗粒可含48000个dna拷贝。 因此,为---pcr试验的数据准确,避免交叉污染,应定期对pcr实验室做dna污染情况的监测。
转移rna
转移rnatrna在蛋白质合成过程中负责转运---酸、---mrna遗传密码。trna占细胞总rna的10%~15%,绝大多数位于细胞质中。trna由crick于1955年提出其存在,zamecnik和 hoagland于1957年鉴定。
trna一级结构具有以下特点:
是一类单链小分子rna,长73~95nt共有序列76nt,沉降系数4s。
是含稀有碱基zui多的rna,含7-15个稀有碱基占全部碱基的15%~20%,位于非配对区。
5′末端碱基往往是鸟piao呤。
3端是cca序列,其中的腺苷酸常称为a76,其3—oh是---酸结合位点。
rna抽取一般使用trizol法抽提:
trizol是一种总rna抽提试剂,内含异硫qing酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的---酶活性。目前常用trizol法进行提取组织或细胞中的rna。
trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中,trizol试剂可保持rna的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯1仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。rna存在于水相中。
水相转移后,rna通过---1醇沉淀回收。移去水相后,用---可从中间相沉淀得到dna,加入---1醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
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