宿迁细胞实验外包动物实验模型 南京英瀚斯生物科技

软gu细胞培养

(1)-脱颈处死，备皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。

(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉，软gu不能暴露)，75%酒精浸泡5分钟，转移至pbs缓冲液中，带入超净工作台，剔除关节周围附着的软组织，打开髋、膝关节，用尖刀削取关节软gu组织，置入装有pbs缓冲液的无菌培养皿，防止软gu组织被风干。2%戊er醛，37℃，4h，弃掉板中的处理液，用pbs洗涤3次，每次3min。

(3)pbs缓冲液充分漂洗软gu小块3次，然后用小剪刀将软gu块切碎至约imm3大小。

(4)再次用pbs缓冲液冲洗3次，滤干，将细小的软gu块置入放有0.2%的ii型胶原酶3ml的广口瓶里，摇匀后置于37°c恒温震荡箱中-，40分钟后将上层-液转移至15ml规格离心管中，800r/min离心5min,收集细胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清dmem培养液4ml并吹打混匀，制成软gu细胞混悬液。滴度检测：将-颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。

(5)把-所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中，经滤网过滤后用细胞计数板计数,并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于co2培养箱内。培养条件为37°c、5%co2。

(6)未-完的软gu小块继续用ii型胶原酶如_上法-，直至软gu块基本消失。

(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。

细胞培养中常见的污染及解决方法

支原体污染

支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 ph 值变化即使在-污染的培养基中，这样就会导致我们产生错误的-。而在牛中，支原体是常见的微生物之一。

解决方法：通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。)4、mdc(monodansylcadaverine，单丹-尸胺)染色:包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特-的。细胞一旦被支原体污染，-是对重要的细胞系，必须去除支原体，一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是，支原体很-的结构特征是没有细胞壁。因此，它对作用于细胞壁的生物合成如 β-内-类、万古等完全不敏感，并且通常对多粘菌素、-和类具有耐药性。相反，四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强，而-糖苷类和氯的抑制作用较弱。