粗提物定量PCR试剂服务介绍 友名生物

pcr引物设计的基本原则

引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c 过多易出现非特异条带。atgc建议随机分布，避免5个以上的piao呤或嘧1啶核苷酸的成串排列参照。

引物内部不应出现互补序列。

两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。

引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，

引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特---扩增。引物3端的碱基，---是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，zui---择是g和c。

引物的5′端可以修饰。如附加---酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地1高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。

等位基因特---pcr(allele- specificpcr. aspcr技术

aspcr依赖于引物3”-端的一个碱基错配,不仅减少多聚酶的延伸效率,而且降低引物-模板复合物的热稳定性。这样有点突变的模板进行pcr扩增后检测不到扩增产物.可用于检测基因点突变。

单链构型多态性pcr(single- strandconformational polymorphism pcr, sscppcr)技术

sscp- pcr是根据形成不同构象的等长dna单链在中性聚丙1烯---凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。在不含变性剂的中性聚丙1烯---凝胶中,单链dna迁移率除与dna长度有关外,更主要取决于dna单链所形成的空间构象。相同长度的单链dna因其顺序不同或单个碱基差异所形成的构象就会不同，pcr产物经变性后进行单链dna凝胶电泳时，每条单链处于一定的位置.靶dna中若发生碱基缺失、插入或单个碱基置换时.就会出现泳动变位。从而提示该片段有基因变异存在。

基因分型

pcr可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如，基因敲除和敲入小鼠等生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼，可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。

但是如果为了检测特定核苷酸突变，则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如， pcr扩增子测序就是研究单核苷酸变异snvs和单核苷酸多态性snp的方法之一。---使用高保真dna聚合酶，以防止在pcr过程中引入多余的突变。

通过pcr进行基因分型也是对癌1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。

目前的------试剂盒，多数采用荧光定量pcr方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有----。那么，---到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、-提取和上机检测五个步骤。

取样

采集人体的分泌物。用鼻-或-擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

-提取

将样本送进实验室进行-提取

上机检测

将提取物进行荧光pcr扩增反应