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southern杂交

实验原理

      southern印迹杂交southern blot是1975年由英---southern创建，是研究dna图谱的基本技术。lncrna和mrna同时检测：芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。southern印迹杂交是进行基因组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经---性内切酶---的dnal片段，将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放l射自显影或酶反应显色，从而检测特定dna分子的含量。

高l效液相色谱法检验方法

高l效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。基因组甲l基化水平(methylationcontent)的分析:1。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离---，分析速度快的特点。

高l效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的---的分析测定，---是多组分---的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的---需要在色谱分离前或后经过衍生化反.应，方能进行分离或检测。而安捷伦和illumina的探针能够在低密度下捕获更多数量的变异。常用的色谱柱填充剂有硅胶用于正相色谱;化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中常用的是十八烷基硅l烷(又称ods)键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

活性氧检测试剂盒reactive oxygen species assay kit是一种利用荧光探针dcfh-da进行活性氧检测的试剂盒。dcfh-da本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成dcfh。而dcfh不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。另一个加入opti-mem、lipo2000，然后将两管混匀。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的dcfh生成有荧光的dcf。检测dcf的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂rosup以便于活性氧的检测。rosup是一种混合物compound mixture，浓度为50mg/ml。

一、注意事项

1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否---。

3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间---时间除外，以减少各种可能的误差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴---手套操作。

单细胞测序英语：single cell sequencing采取优化的下一代dna测序技术ngs检测单细胞的序列，可以获得特定微环境下的细胞序列差异以方便研究其功能差异等。对个体细胞的dna测序可以帮助我们了解例如在中的小范围细胞的变异；对其进行rna测序可以帮助我们了解和鉴别不同的细胞类型与其表现的基因，对研究发育生物学等有较大裨益。5mol/l氨加入2倍体积的无水---，混匀后室温沉淀2min，离心12000rpm,10min。

分离单细胞

在全基因组扩增和测序前，有很多方法可以分离细胞个体，其中流式细胞术facs较为常用。个体细胞可以用显微操作来收集，这样较为快捷而且成本较低，但是比较有技术难度，而且显微镜下对细胞的错误分类容易影响实验结果。激光捕获显微切割技术lcm亦可以用来收集单细胞。不同个体之间在一个同源str位点的重复次数也不同，因而同指纹识别一样，str位点分析也可对个体进行身份识别。但是尽管激光捕获显微切割可以保留样本细胞在组织中的空间位置，但是捕获单细胞的时候容易连带周围细胞的物质。高通量的细胞个体分离还可以使用微流控技术。微流控技术和流式细胞技术都能准确而自动地分离无偏样本。但是，两种方法都要求首先将细胞从其为环境中脱离，因此可能在rna表达分析中造成对转录数据的干扰。