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层析chromatography是“色层分析”的简称。利用各组分物理性质的不同,将多组分混合物进行分离及测定的方法。有吸附层析、分配层析两种。一般用于有机化合物、金属离子、---酸等的分析。层析利用物质在固定相与流动相之间不同的分配比例,达到分离目的的技术。层析对生物大分子如蛋白质和-等复杂的有机物的混合物的分离分析有---的分辨力。
用作固定相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等,或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体,也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析column chromatogra-phy,在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析thin-layer chromatography,后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析,即在固定相的一端,点上微量试料,在密闭容器中,使移动相液体从此端渗入,移动接近另一端。通过这种展开操作,各成分呈斑点状移动到各自的位置上,再根据rf值的测定进行鉴定。当斑点不易为肉眼观察时,可利用适当的显色剂,或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。也可采用在种移动相展开后再用另一移动相进行展开这时的展开方向应与原方向垂直,使各成分分离完全的双向层析two-dimensional chromatography。
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离子交换层析根据化合物的净电荷进行分离。带负电荷或正电荷的---团共价结合于固相载体基质,分别成为阳离子交换剂和阴离子交换剂。当一个带电荷的分子加入到带有相反电荷的交换剂时,它就会被吸附,同时,带相同电荷的离子和中性分子则被洗脱到层析柱的外水体积里。带电荷分子的结合是可逆的,通常可用盐或ph梯度洗脱吸附的分子。 离子交换层析可以有多种应用,包括分离和纯化生物分子,分离无机离子,试剂和水的去离子化,盐转换以及去除金属离子、化乙锭和sds。 化合物的分离策略。如果分子在ph高于其等电点时稳定,可使用阴离子交换树脂。如果分子在ph低于其等电点时稳定,则使用阳离子交换树脂。
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