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如何评价和选择支原体检测试剂盒

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的cfu表示。

2. 特---和广谱性。

---的试剂盒应检测的支原体物种越多越多，并且特---强，即只针对支原体，不针对其他---等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

---比液体试剂的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的试剂盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制pcr反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的试剂盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测pcr是否正常。如果样本含有抑制pcr的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有---支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制，因此支原体条带越强，内控条带越弱

dna提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组dna的试剂盒。氯化1苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的------化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化1苄的这一特性，将植物样品---融解后，再使用pipet tip的尖1端将植物样品在microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于---处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组dna可以进行pcr扩增及---酶处理等。

dna提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组dna提取试剂盒、中量全血基因组dna提取试剂盒、组织/细胞基因组dna提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组dna提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组dna提取试剂盒、ctab植物基因dna提取试剂盒、新型植物基因组dna提取试剂盒、酵母基因组dna提取试剂盒、m13噬菌体单链基因组dna提取试剂盒。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测dna在od260处有明显吸收峰，当od260=1时，相当于大约50 ng/μl双链dna、40 ng/μl单链dna。od260/od280≈1.6~1.9时，说明dna纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.sybr法检测取回收产物1 μl，与1 μl sybr染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μl，与10×loading buffer混匀，dna marker加5 μl，电泳后凝胶成像观察。5 μl dna marker相当于每个条带50 ng dna，观察目的条带亮度大致为marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μl。