大鼠抗小鼠IGM-「博特龙」

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、---包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和hrp、biotin、fitc、au、pe、dylight、alexa fluor、cy3、cy5、 amca、tritc、texa red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有wb、ihc、elisa、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。

不同亚型的抗0体在结构上有所区别，其免0疫源性与在体内发挥的作用存在差异，对抗0体进行进一步的细分，并进行抗0体亚型鉴定，对于---作用机理的研究、抗0体药0物的开发有重要意义。那么什么是抗0体亚型鉴定？众所周知，亚型指的是相同的构成方式，但是空间结构不同的蛋白质结构。抗0体亚型，指的是在机体内产生的“y”构型的免0疫球蛋白ig，基于小分子多肽结构上的差异，可以进一步的进行细分。相关抗0体亚型鉴定有：igg1，igg2a，igg2b，igg3，igm，iga 的鉴定。

实验步骤：

1、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 a 和显色剂 b 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、elisa试剂盒特---好一般肉眼即---察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 ig 类或亚类。更可将反应终止液每孔50μl终止反应后用酶0标仪450nm 测长，630nm 参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 ig 类或亚类(阳性对照 od 一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品 od 大于阴性 od+0.15，阴性 od 低于0.05按0.05算)。

注意事项：

1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。

2、在检测腹0水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的 bf06004小鼠单抗 ig 类/亚类鉴定用酶标二抗套装。它会给您带来满意的结果，同时您也可以使用抗原包被板来解决此类问题。

3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，zui后要拍干净。---是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。

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取血：

免0疫一周后，可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免0疫后，可以获得较高0效价的抗0体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血0清。

zui后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：

1、家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离，剥离神经和结缔组织。

4、于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下，用尖头眼0科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。

6、松开止血钳，使---流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。