HRP-小鼠抗大鼠IGG FC- 苏州博特龙
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、---包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和hrp、biotin、fitc、au、pe、dylight、alexa fluor、cy3、cy5、 amca、tritc、texa red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有wb、ihc、elisa、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
抗0体亚型鉴定原理:
抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类可区分出 igg1﹨igg2a﹨igg2b﹨igg3﹨igm﹨iga。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合,再加入hrp 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应,zui后用 tmb 底物系统显色并用稀---终止,再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。
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血0清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oc烘箱2hr,转移到4oc沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血0清。如果用离心管收集,37oc烘箱放置2hr,转移到4oc沉淀过夜,第二天早上离心,10000rcf,10分钟。在血0清中加入nan3 至终浓度0.02%,分装后-20oc保存。
小结:抗血0清获得之前要件的抗0体的效价、抗0体的特---以及抗0体的亲和力;获得抗血0清之后,要分装保存抗血0清,一般情况下,-20度可保存数月至数年抗0体的效价都不会发生变化。抗0体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免0疫吸附试验进行鉴定。
单克0隆抗0体单抗制备制备过程有以下几个步骤:
步骤一:细胞免0疫
免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏b淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注射。 抗原通过---循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,---相应b淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏b淋巴细胞。
步骤二:细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
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