海南--「多图」

---检测

     本公司应用mtt比色法， 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的---脱氢酶能催化外源性无色的mtt形成蓝色的结晶formazan，并沉积在细胞中，而---无此功能。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10ml37预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。二jia基---dmso能溶解细胞中的formazan，用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值，可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内，mtt结晶形成的量与细胞数成正比。

     该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、-的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏感性测定等。服务内容      1. 细胞接种：收到客户细胞后，我们会用细胞计数板计数细胞，得出细胞悬液浓度。7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40日中不会凝固。计算出应稀释的倍数，按mtt试剂盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液；

     2. 细胞培养：然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板，并实时观察细胞状态；  

     3. yao物处理并呈色：按不同浓度梯度加入yao物作用细胞；

     4. 溶解，比色：加入mtt检测试剂，按操作要求孵育相应时间，在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。

小鼠精原gan细胞分离富集和培养

成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02～0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mm edta---gao丸10min,用胎牛xue清终止---,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(cd90.2)阳性cd117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前cd117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,cd90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,cd117阴性cd90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 cd117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,cd90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,cd117阴性cd90.2阳性细胞占32.36±3.67%;cd117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无---性(p>;0.1),cd90.2阳性细胞和cd117阴性和cd90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有---性 (p<0.05);采用cd117和cd90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经facs分选后获得细胞纯度

yao物对细胞的ic50检测  

     ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的半量。小鼠精原gan细胞分离富集和培养成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的0。在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药wu-肿liu细胞凋亡50%，该浓度称为50%抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度，ic50值可以用来衡量yao物-凋亡的能力，即-能力越强，该数值越低，当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。

脂质体瞬时转染

1、细胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。

2、转染前换上没有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。

3、将质粒dna (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。

4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。

5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。

6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。

7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。

8、培养24小时。