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原位杂交中探针的选择

dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也---，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶---序列，增加检测的灵敏度。

杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性，较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4m的na离子浓度，对tm值、双链复性速率的影响不大，但随着na离子浓度的降低，将---影响tm值和双链复性速率。

有2机溶2剂---胺的作用是降低dna-dna和dna-rna等双链体的解链温度。通常dna需要在0.1~0.2m na+ 90~100℃的条件下变性，那么应用于原位杂交，样品必须在65~75℃的条件下进---时间变性，这将导致样品形态学的破坏。50%---胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。

---葡聚糖具有很强的水合性，高浓度的---葡聚糖会使得---分子无法获得周边亲水环境，增加了探针浓度，加快杂交反应速率。

原位杂交组织或细胞化学技术简称原位杂交in situ hybridization, ish是应用已知碱基顺序并带有标记物的---探针与组织细胞内待测的---，按碱基互补配对原则进行特---结合，形成杂交体，然后用与标记物相应的检测系统，通过组织化学或免3疫组织化学方法在---原有位置进行细胞内定位、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内基因表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为组织化学与免3疫组织化学的重大突破。

原位杂交不需要从组织中提取---，对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性，并可完整地保护组织和细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。