WB缓冲液-「友名生物」

dna连接酶与dna聚合酶的区别？

形成方式不同

dna连接酶是在两个dna部分片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与dna部分片段之间形成磷酸二酯键。dna连接酶都不能催化两条游离的dna链相连接。

dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的dna1片段上，形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用，催化原来的dna进行复1制，然后将原来的dna和复1制以后的dna进行模板配对后，连接聚合在一起，就可以形成新的dna链。

dna 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在dna的copy和修复过程中起着重要的作用。dna连接酶分为两大类:一类是利用atp 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖atp的dna 连接酶，另一类是利用烟---腺piao呤二核苷酸(nad+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖nad* 的dna 连接酶。

dna连接酶dna ligase也称dna黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接dna链3-oh末端和，另一dna链的5-p末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的dna链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗atp。

dna新链的延伸由dna聚合酶 iii所催化。为了copy的不断进行，解旋酶须沿着模板前进, 边移动边解开双链。由于dna的解链，在dna双链区势必产生正超螺旋，在环状dna中更为明显，当达到一定程度后就可能造成copy叉难以再继续前进，但在细胞内dna的copy不会因出现拓扑学问题而停止，因为拓扑异构酶会解决这一问题。

随着引发体合成rna引物，dna聚合酶 iii开始不断地将引物延伸，合成dna。dna聚合酶 iii是一个多亚基复合二聚体，一个单体用于前导链的合成，另一个单体用于滞后链的合成，因此它可以在同一时间分别copydna前导链和滞后链。虽然dna前导链和滞后链copy的方向不同，但如果滞后链模板环绕dna聚合酶iii,并通过dna聚合酶 iii,然后再折向未解链的双链dna的方向，则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向进行。

所有合成cdna条链的方法都要用依赖于rna的dna聚合酶(反转录酶)来催化反应，主要有两个关键因素，一个是mrna模板，另一个是反转录酶 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤---纯化到的禽类成髓细胞---amv逆转录酶和从表达化的moloney鼠---反转录酶基因的大肠中分离到的鼠---mlv反转录酶。amv反转录酶包括2个具有若干种酶活性的多肽亚基，这些活性包括依赖于rna的dna合成，依赖于dna的dna合成以及对dna-rna杂交体的rna部分进行内切降解rna酶h活性。mlv反转录酶只有单个多肽亚基，兼备依赖于rna和依赖于dna的dna合成活性，但降解dna—rna杂交体中的rna的能力较弱。且其热稳定性较amv反转录酶差。mlv反转录酶能合成较长的edna如大于2～3kb。amv反转录酶和mi。v反转录酶利用rna模板合成cdna时的适ph、适盐浓度和适温度各不相同．所以合成链时相应调整条件是非常重要的。