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pcr扩增的原理

实验方法原理

模板dna的变性：模板dna经加热至94℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；

模板dna与引物的退火(复性)：模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；

引物的延伸：dna模板--引物结合物在taq酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留copy原理，合成一条新的与模板dna 链互补的半保留复1制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复1制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

典型的pcr包括高温变性、低温退火、中温延伸三个步骤，通过将这一套过程不断循环，使dna得以成百万倍的扩增。

pcr反应特点

灵敏度高：pcr产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12量级的起始待测模板扩增到微克μg=-6水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞；在-的检测中，pcr的灵敏度可达3个rfu(空斑形成单位；在-学中zui小检出率为3个-。

简便、快速：pcr反应用耐高温的taq dna聚合酶，-地将反应液加好后，即在dna扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放1射性污染、易推广。

纯度要求低：不需要分离-或-及培养细胞，dna 粗制品及rna均可作为扩增模板。可直接用-标本如-、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等dna扩增检测。

la pcr的原理

la pcr的关键是具有3′***5′exonuclease活性 (proof reading活性) 的耐热性dna聚合酶。在pcr过程中当有错误的碱基摄入时，反应性能将大幅度下降，takara ex taq 和takara la taq 依靠3′***5′exonuclease活性可将错配的碱基除去，从而延伸反应能顺利地进行下去，使长链dna的扩增成为可能。