人环磷酸腺苷 CAMP ELISA询问报价「武汉纽斯特」

对于生长的组织培养液中的细胞，首先移除培养基，然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解；如果裂解不充分，接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心，收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内，去污剂并不干扰试验的结合部位，但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度，为了较精l确的测定，标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓---，600g离心力于室温离心，上清液直接用于实验测定分析。

实验步骤

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μl中和液至各个微孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。

3. 移取100μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔和b0孔(0 pmol/ml camp标准品)。

4. 移取100μl camp标准品至相应的孔。

5. 移取100μl样品至相应的孔。

6. 移取50μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔。7. 移取50μl 偶联酶至各孔中，除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。

8. 移取50μl 抗l体工作液至各孔中，除了ta(全活性)孔、blank(空白)孔和nsb(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μl每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以---没有洗涤液残留。

12. 加5μl 偶联酶至ta(全活性)孔。

13. 每孔200μl显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。显色底物a和b需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。

14. 每孔加入50μl终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的blank(空白)孔光密度值。

武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd，系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等。

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以---实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特---反应，可采用羊血l清、兔血l清或bsa等封闭。