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液相色谱仪在生物制药中的应用

液相色谱仪是近几十年发展起来的一种、快速的分离分析技术，是现代分离检测的重要工具。液相色谱仪是以---液相色谱仪为基础，引入气相色谱仪的理论和实验方法，将流动相改为高压输送，采用固定相和在线检测等手段，发展而成的分离分析技术，具有高压、高速、、高灵敏度、高选择性和应用范围广等特点，成为生物制药领域发展快、应用的现代分析技术之一。

液相色谱柱性能评价

色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。在正常条件下，填料粒度>;20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒<20μm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；径向加压法，waters；轴向加压法，主要用于装填大直径柱；干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。

液相色谱柱作用

柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱5~30mm，可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在ph2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，---是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。

每次工作完后，---洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ods柱宜用冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素氟、氯、的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在hplc仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。

液相色谱柱优势

硅胶的化学稳定性较差，仅能在ph=2~8的环境下工作。但是，在很多场合下，需要使用的ph条件。为此，人们曾大力发展高分子微球、氧化铝、氧化锆等化学稳定性---的基质材料。但是，很难有一种材料能地满足液相色谱基质的要求。例如，高分子微球在中会发生一些溶胀，因此难以应用于以含的流动相进行梯度淋洗的场合；氧化铝和氧化锆与硅胶相比，虽然化学稳定性较好，但其表面修饰与键合比较困难。因此，化学稳定性好的碳材料便很自然地被考虑作为色谱填料的基质。

碳材料有的化学稳定性，可耐受宽达ph=1~14的环境；耐高温，石墨化碳可耐3000℃以上的高温而不受破坏；经适当加工的碳材料可具有---的机械强度，具有优良的导电性、导热性及电磁屏蔽特性。更为难能可贵的是，多孔性碳材料以其结构的特点而具有---的吸附性及选择性。正是碳材料的这些特性，使人们期待它在色谱领域中能有特殊的用途。