原位杂交-「思特进」

原位杂交技术可应用于什么方面

1.细胞特---mrna转录的定位　可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。

2.感6染组织中---dna/rna的检测和定位，如eb---mrna、人类乳3头状瘤---和巨细胞---dna的检测。

3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

４.基因在染色体上的定位。

5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传

多种探针标记检测系统

基于地高3辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。

荧光标记检测常为直接探针标记方法，如在dutp/utp/ddutp上连接fluorescein后进行---标记。由于标记在---上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验，以及荧光分子易于衰减，其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。

间接标记的方法中应用了报告分子标记的探针，报告分子通过亲和酶促的方法进行显色。常用的报告分子如地高6辛，生物素。结合地高6辛抗6体或链霉亲和素上耦联的酶系统进行间接的底物反应检测。地高6辛标记---的历史可追溯到1987年，由于地高6辛是洋地黄的花和叶中特有的成分，检测时使用的地高6辛抗6体不会结合于其他的生物分子。这是相较于生物素标记系统的优势。地高6辛抗6体上可耦联碱性磷酸酶、---化酶，及荧光分子和胶体金等，根据不同的应用需求，呈现高信噪比的---结果。但需注意，由于引入了免6疫检测反应，在放大检测灵敏度的同时，应注意样品内源性酶的灭活，以降低检测背景。

通过不同标记方法的联合应用，还可在同一样本中实现染色体不同区域或细胞样本中不同rna序列的多重检测。