辽宁玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒厂家信息「多图」
1、 操作过程中避免任何细胞---。使用不含热原和内---的试管。收集---后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:edta、柠檬酸盐、---血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并---样品均匀地充分解冻。
此ibl试剂盒能用于小鼠清,edta血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测。
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以---实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特---反应。
实验条件的选择
在elisa中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
1固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚乙烯、聚丙---和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否---。
2包被或抗原的选择:将或抗原吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求ph在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度0.1、1.0和10μg/ml等进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的od值。选择od值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
3酶标记工作浓度的选择:首先用直接elisa法进行初步效价的滴定见酶标记部份。然后再固定其它条件或采取“方阵法”包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
4酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是---、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体如opd等有潜在的---作用,应注意防护。有条件者应使用不---、灵敏度高的供氢体,如tmb和abts是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是h2o2在临用前加入。
检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,---实验结果的重复性。
1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶标记物。
解决办法:请按照操作步骤进行。
b.原因:试剂盒内容物未能充分回。
解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因:室温太低。
解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。
d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因:试剂盒已过有效期限。
解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
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