CPG佐剂服务「博特龙」

quickantibody抗0体产生快，抗0体滴度高，抗0体亲合力高。以标准免0疫程序为例，无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备，只需要在三周内进行两针免0疫，通常在第五周即可获得elisa滴

度cutoff值为0.1000---1:10000-1:10000000的高亲合力抗0体水平。

quickantibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

quickantibody是水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免0疫动物。

quickantibody使用肌肉免0疫途径，与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫或脾内免0疫相比，---方便了使用。

材料与方法

一、材料

afp购自上海领潮公司。sp2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。spf级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量---，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：afp50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。

饲养层细胞制备

于细胞融合前---，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成---的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。

使用方法    

1.  用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制。备注：使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。

2.  用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。

3.  通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

1佐剂与抗原混合后应尽快注射，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

2抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快注射；

3尽量选择---淋巴0结附近如腋窝和腹0股0沟附近的皮下或肌肉进行免0疫。