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elisa试剂盒的测定原理

测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断剂离不开好的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。

elisa试剂盒——elisa实验常见问题及解决方案

显色淡，灵敏度偏低

1  试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，---所有试剂已平衡至室温约25℃

2  样品不适合做elisa检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做elisa检测或者需要优化检测的条件例如稀释液的成分

3  酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥

4  包被遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底

5  样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。

6  洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；

7  偶联hrp试剂污染 弃去试剂，重新配置

8  错误的稀释偶联hrp试剂 弃去试剂，重新配置

9  tmb底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；s4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定od值达到0.6-0.65

10  样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。

11  滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12  酶标板不适合做elisa 不能使用细胞培养板，建议使用elisa高吸附力板子。

重复性不佳，高cv值 

1  样品不均一 加样前充分混匀样品，取样---移液位置一致；

2  包被板表面遭到破坏 洗板加样时尽量小心，避免破坏板的包被表面

3  孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用

4  加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

5  边缘效应外周孔显色较中心孔深 孵育时尽量100 rpm旋转混匀

6  微量加样不准确 ---微量加样的准确性和均一性

7  不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤

现白板，阳性对照不显色 

1  显色液变质 更换新的显色液

2  洗涤液配制有误 请按说明书所示稀释倍数配制

3  未加酶结合物而认为已加入 注意不要漏加

4  终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用 每次加液前均应看清标签

5  标准品稀释方法错误/或标准品有问题 请按照说明书所示配置说明书，注意单位和稀释倍数

6  不同试剂盒或不同批号的试剂混用 建议使用同批次试剂盒。不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。