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原位杂交检测承诺守信「在线咨询」

发布者:武汉思特进科技发展有限公司  时间:2022-8-25 






原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽-离的染色体dna,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(w.d.benton)和戴维斯(r.w.davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的dna,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体dna上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的dna序列或任何一种插入的dna序列,以及动植物的基因定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)




原位杂交技术基本原理

原位杂交技术的基本原理是利用-分子单链之间有互补的碱基序列,将有放6射性或非放6射性的外源-(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,结合成专一的-杂交分子,经一定的检测手段将待测-在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

为显示特定的-序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。





原位杂交组织或细胞化学技术简称原位杂交in situ hybridization, ish是应用已知碱基顺序并带有标记物的-探针与组织细胞内待测的-,按碱基互补配对原则进行特-结合,形成杂交体,然后用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免3疫组织化学方法在-原有位置进行细胞内定位、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内基因表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为组织化学与免3疫组织化学的重大突破。

原位杂交不需要从组织中提取-,对于组织中含量极低的靶序列有-的敏感性,并可完整地保护组织和细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。





总的来说,随探针浓度增加,杂交率也增加。另外,在较窄的范围内,随探针浓度增加,敏感性增加。依我们的经验,要获得较满意的敏感性,膜杂交中32p标记探针与非放0射性标记探针的用量分别为5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位杂交中,无论应用何种标记探针,其用量均为0.5~5.0μg/ml。探针的任何内在物理特性均不影响其使用浓度,但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。




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