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吉林实时荧光定量PCR仪欢迎来电 南京精塞玛
发布者：南京精塞玛科学仪器有限公司 时间：2022-8-30
1. 模板-模板(靶基因或样品dna)-的量与纯化程度是pcr成败与否的关键环节之一。一般-检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，-除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于pcr扩增。dna模板提取一般采用异-胍或蛋白酶k法，要防止核糖-酶(ribonuclease，rnase)降解rna。2. 引物pcr产物的特-取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链作引物。每条引物链的浓度为0.1~1μmol或10-100pmol，以反应所需要的低引物量的浓度为好。3. dna聚合酶taqdna聚合酶基因全长2496个碱基，75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，在pcr循环的高温条件下仍能保持较高的活性和-的热稳定性，温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响taqdna聚合酶的活性。目前，有两种taqdna聚合酶供应，一种是从栖热水生中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则pcr反应变为双重pcr，双重pcr反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为-。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
pcr：pcr聚合酶链式反应是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温经常是60°c左右时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶适反应温度72°c左右，dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链。pcr仪实际就是一个温控设备，能在95℃，55℃，72℃之间-地进行温度控制。pcr扩增仪又称为pcr基因扩增仪、pcr-扩增仪、聚合酶链反应-扩增仪，是利用pcr(polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定dna扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传-的图谱、病的诊断、基因以及等。
根据dna扩增的目的和检测的标准，可以将pcr仪分为普通pcr仪，梯度pcr仪，原位pcr仪，实时荧光定量pcr仪四类。
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