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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，hplc也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，a、b和c，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分a不易被固定相阻留，较早地流-谱柱。分配系数大的组分c在固定相上滞留时间长，较晚流-谱柱。组分b的分配系数介于a，c之间，第二个流-谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流-谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱的发展变化介绍

   液相色谱色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法正相与反相、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。    液相色谱的发展，涉及键合相，基于被测物质在固定相含液体和流动相之间的相对溶解度的差异，通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。将固定液机械地涂渍在担体上组成固定相。化学键合固定相。这种固定相是通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶载体表面的游离-上，代替机械涂渍的液体固定相。这不仅避免了液体固定相流失的困扰，还大大-了固定相的功能，提高了分离的选择性，化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。

什么是液相色谱?

液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 mikhails. 茨维特提出的。他先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物(树叶色素)。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品(混匀植物叶的溶剂提取物)倒入柱中，并让样品流过颗、粒床。随后加入纯溶剂。随着样品由于重力自上而-过柱子，可看到不同颜色的谱带被分开，因为有些组分比另外一些移动得快。他将这些分开的不同颜色的谱带与样品中原有的不同化合物相关联。他还根据每一种化合物对填料的化学亲和性强弱，提出了分析这些化合物的分离规律。与颗粒填料有较强亲和性的化合物移动慢，与溶剂有较强亲和性的化合物移动快。这个过程可这样描述:样品中的化合物在流动的溶剂(流动相)与固体颗粒(固定相)间的分布不一样。这样使每一种化合物以不同的速度移动，从而产生了化合物之间的分离。

液相色谱仪

20世纪初在-的波兰植物化学家茨维特twseet首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同，因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。

1941年，马丁与辛格用一根装满硅胶微粒的色谱柱，完成了-化-的分离，开启了液色谱技术，因此获得诺贝尔化学奖。1949年，马丁建立了色谱保留值与热力学常数之间的关系，奠定了物化色谱的基础；1952年，马丁与辛格又创立了气液色谱法，分离了脂肪酸与脂肪胺。1966年之前科学家所做的努力，为传统-液相色谱奠定了基础。

而液相色谱仪的-则是由斯坦因与莫尔于1958年设计的-酸分析仪，这种仪器能够分蛋白质水解的产物。首台商用lc则是由沃特斯公司制造。

1971年之后，液相色谱技术得到了飞速的发展，hplc的分析体制也逐步完善。到了二十世纪八十年代中期，液相色谱技术已经非常非常成熟，激动人心的新发展日趋减少，人们开始转向相关领域发展，如超临界色谱、毛管电泳色谱、制备色谱等。