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试剂准备

1. 非-化camp标准品

将5000 pmol/ml camp标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μl 0.1m hcl到#1号试管，400μl到#2至#6号试管。加入25μl 5000 pmol/ml camp标准品到#1管中，剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μl溶液至#2管中，涡旋震荡。以此类推，重复上步操作，梯度稀释至#6管。

经以上操作，#1至#6管中camp标准品浓度分别为250,50，10,2,0.4和0.08 pmol/ml详见camp实验稀释详情键盘纸。稀释过的标准品需在30分钟内使用。

标记一只试管作为无标准品空白对照nsb。移取600μl 0.1m hcl到nsb管中。

2. 洗涤液

将15 ml 10×洗涤液储液加到135 ml去离子水中，稀释成工作液。稀释液可在室温保存至试剂盒有效期限，或者3个月。

武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd，系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。美国neweastbio-于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等，与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。

环磷酸鸟苷鸟苷-3′,5′-环化一磷酸，c-在许多生理过程中发挥着重要的调控作用。c-由鸟苷酸环化酶产生，而被磷酸二酯酶降解，因此激l活鸟苷酸环化酶或者抑制磷酸二酯酶可以提高细胞内c-的含量。研究发现，c-特-磷酸二酯酶的抑制l剂可用于治l疗人类-。

武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd，系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio-于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等，与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。

体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的ras被激l活，而在体外用gtpγs处理大约有90%的ras被激l活。

1.        

准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物如果是纯的ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug。

2.        

每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。

3.        

一个管中加入5ul的100x gtpγs终浓度即为100 um作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp终浓度即为1 mm作为阴性对照。

4.        

将离心管置于30°c条件下反应30 min并不断搅动。

5.        

终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。