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lncrna芯片

long non-coding rnaslncrnas是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码rna分子。目前的研究已证实，lncrna参与x染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录ji活，转录干扰，核内运输等多种重要调控过程。结束反应,pcr产物放置于4°c待电泳检测或-20°c长期保存。随着对lncrna在哺乳动物进化及人类-发生和发展中作用的日益关注，lncrna调控机制已成为当前遗传学研究的-问题。

筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类-发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncrna芯片进行lncrna表达谱分析，该芯片基于agilent的sureprint技术生产，实验。

技术优势

信息覆盖广泛：覆盖了多个quan威lncrna数据库发布的数据；提供人，小鼠，大鼠的lncrna检测。

lncrna和mrna同时检测：芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncrna和mrna进行分析。

平台成熟-：采用agilent原位喷墨合成技术，了高检测灵敏度和特-。

数据分析：提供lncrna和mrna表达谱差异分析和功能分析，以及二者的关联分析。

蛋白提取

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液, 少数与脂类结合的蛋白质则溶于-、-等有ji溶剂中，因些，可 采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

(一)水溶液提取法

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。此外，illumina还捕获了未翻译的区域，这是nimblegen和安捷伦平台无法靶定的。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度-于溶 解，缩短提取时间。但另一方面. ,温度升高会使蛋白质变性失活,因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温( 5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白 水解酶抑zhi剂(如二yi--,碘yi酸等)。

22.同样的od用page检测，eb染色为什么深浅不一？

答：通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna)，因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，eb的染色程度也会有差异，比如oligo(dt)等不形成二级结构，eb染色效果就非常差。有丝分裂过程中dna链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致str产生的较为常见原因，并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间，fu制滑动发生的概率也不相同。所以不要用eb染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。同样道理，用eb染色来照片不适合所有引物。

23.引物不纯会有什么后果？

答：引物不纯可能会导致：1)非特-扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，-是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。

24.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？

答：如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或-酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类-发生中所扮演角色的基础。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的ph值比较低ph4-5, 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是pcr使用材料-是模板的与先前使用的不完全一致。