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透射式电子显微镜镜筒的顶部是电子枪，电子由钨丝热阴极发射出、通过1，第二两个聚光镜使电子束---。电子束通过样品后由物镜成像于中间镜上，再通过中间镜和投影镜逐级放大，成像于荧光屏或照相干版上。透射电子显微镜(transmissionelectronmicroscope,简称tem),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0。中间镜主要通过对励磁电流的调节，放大倍数可从几十倍连续地变化到几十万倍；改变中间镜的焦距，即可在同一样品的微小部位上得到电子显微像和电子衍射图像。

抽真空：接通透射电镜总电源，打开冷却水，接通抽真空开关，真空系统就自动的抽真空。一般经15～20min后，真空度即可达到10-4~10-5torr，持高真空指示灯亮后，透射电镜即可开始使用。

加电子枪高压：接通透射电镜镜筒内的电源，给电子枪和透镜供电，由低---速级给电子枪加高压，直至所需值。

一、细胞取材流程及要求 取材流程：细胞直接刮下不可胰酶---，会造成细胞损伤，细胞悬

液离心，弃上清，pbs 洗 2 次敏感的细胞直接固定，不洗，否则会造成

细胞器损伤，低速1000-3000rpm离心成团，加入组织及细胞电镜 2.5%固定 液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为 细胞悬浮液操作。固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到 pbs 中，后续 操作一致。

取材要求： 1、细胞数量充足6cm 或 10cm 皿长满，离心后在 ep 管中绿豆大小； 2、缓冲液、固定液等 ph 值 7.3-7.4，4℃提前预冷；放大倍数是显像管上扫描幅度与样品上扫描幅度之比，可从几十倍连续地变化到几十万倍。 3、贴壁细胞连着培养基用细胞刮斜着朝一个方向快速铲下，不要反复来回刮； 4、细胞悬液转入离心管，1000-3000rpm

离心成团，弃上清，加 pbs，将细胞转入 1.5ml 尖 头 ep 管，再次离心后弃上清。再加

pbs 重复上述步骤，后加

2.5%固定，4℃保存。 操作轻柔，尽量---细胞不散开。(转速及时间请结合细胞情况，尽量低转速、短时间，以 细胞离心成团为准！pbs 清洗时间过长，易造成细胞损伤)；