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{微生物检测}微生物分离纯化

4、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远---过其他微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的---在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。

5、厌氧法

在实验室中，为了分离某些yanyangjun，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用n2或co2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。有时为了更有效地分离某些yanyangjun，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

6、单细胞(或单孢子)分离法

是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微zhen、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixedculture)。

非无菌---微生物限度标准

   除了本限度标准所列的控制菌外，---中若检出其他可能具有潜在危害性的微生物，应从以下方面进行评估。

   ---的给药途径：给药途径不同，其危害不同；

   ---的特性：---是否促进微生物生长，或者---是否有足够的抑制微生物生长能力；

   ---的使用方法；

   用药人群：用药人群不同，如新生儿、婴幼儿及体弱者，风险可能不同；

   ---使用mian疫抑zhi剂和甾体类固醇激su等---的情况；

   存在---、伤残和器guan损伤；等等。

   当进行上述相关因素的风险评估时，评估人员应经过微生物学和微生物数据分析等方面的知识培训。评估原辅料微生物时，应考虑相应制剂的生产工艺、现有的检测技术及原辅料符合该标准的---性。

培养基适用性检查

微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述，下文还有，不再赘述。

计数方法适用性试验

供试液制备

根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°c。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

学习：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。“供试液制备”这一节，水溶性供试品、水不溶性非油脂供试品、油脂类供试品的制备方法无变化。在2020版药典中，将原“(4)需用特殊方法制备供试液的供试品”中的小类四种提升至与上述3类并列表述，除气雾剂供试品外，制备方法无变化。具体是膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂供试品2015版：气雾剂、---供试品、贴剂、贴膏剂供试品2015版：贴膏剂供试品。38-2012食品安全标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数gb4789。