SUPERNUCLEASE承诺守信「博特龙」

抗原制备及纯化

抗原制备: 参照文献［10］制备 mrj 抗原。复苏pet28a-mrj 转 rosetta 菌0种 接 种 于 具 kana 抗 性 的10 ml液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 od600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /l 的 iptg，37 ℃ --- 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /l 浓度的iptg，37 ℃ 条件下大量---( 200 ml 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 mrj 蛋白过 ni-ida 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。

原理

新型乳剂是一种具有自主---、独0特配方的新型油包水佐剂，用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免0疫---0活性的tlr配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：

1新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂；

2与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分；

3安全性好，副反应率低；

4免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。

1.  第21天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

2.  第35天采微量血进行elisa测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。

3.  若抗0体滴度没有达到要求，可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免0疫2针，而家兔往往需要免0疫3针。

4.  若免0疫3针，可在第52-56天采微量血进行elisa测定，抗0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。备注：佐剂免0疫效果有时也与抗原特性有关，若免0疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免0疫。