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{微生物检测}微生物分离纯化

4、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远---过其他微生物。5、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

5、厌氧法

在实验室中，为了分离某些yanyangjun，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡为单位报告，特殊品种可以xiao包装单位报告。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用n2或co2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些yanyangjun，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

6、单细胞(或单孢子)分离法

是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。2、---细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微zhen、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。

---效力

试验所用的菌株传代次数不得超过 5 代从jun种保藏中心获得的冷冻干燥jun种为第 0 代，并采用适宜的jun种保藏技术进行保存，以---试验菌株的生物学特性。培养基适用性检查的jun种及新鲜菌体培养见表 1。

表 1培养基适用性检查、方法适用性试验、---效力测定用的试验菌培养条件

试验菌株                   试验培养基                         培养温度             培养时间

1、金黄色putao球菌

胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基

30～35℃

18～24小时

2、铜绿假单胞菌

3、大肠埃希菌

胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大

豆胨液体培养基

4、白色nian珠菌

沙氏---琼脂培养基或沙氏葡

萄糖液体培养基

20～25℃

24-48小时

5、黑曲霉

20～25℃5～7天或直到获得丰富的孢子

武汉世纪久海检测技术有限公司可为客户提供的微生物限度技术服务。微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括---数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

服务项目：

1.微生物限度一般做---总数，霉菌 &酵母菌，大肠埃希菌等。

2.微生物限度方法开发样品量 20g/批，一个批次。

3.微生物限度方法验证(样品量 80g/批，三个批次)。

4.微生物限度测试(3 个批次产品，样品量 40g/批)。

培养基适用性检查

微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述，下文还有，不再赘述。

计数方法适用性试验

供试液制备

根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°c。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

学习：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。“供试液制备”这一节，水溶性供试品、水不溶性非油脂供试品、油脂类供试品的制备方法无变化。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。在2020版药典中，将原“(4)需用特殊方法制备供试液的供试品”中的小类四种提升至与上述3类并列表述，除气雾剂供试品外，制备方法无变化。具体是膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂供试品2015版：气雾剂、---供试品、贴剂、贴膏剂供试品2015版：贴膏剂供试品。