湖北人手微生物限度检查方法-「世纪久海」

微生物限度检查

4需用特殊方法制备供试液的供试品

  膜剂供试品 取供试品，剪碎，加ph7.0无菌----蛋白胨缓冲液，或ph7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1：10的供试液。若需要，调节供试液ph值至6～8。---时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品，加入ph6.8无菌磷酸盐缓冲液用于肠溶制剂或ph7.6 无菌磷酸盐缓冲液用于结肠溶制剂，置45℃水浴中，振摇，使溶解，制成1：10的供试液。---时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  气雾剂、---供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。另一种方法是，在接种后，利用n2或co2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。用无菌zhu射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检查。

  贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料如无菌纱布，避免贴膏剂粘贴在一起。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂如聚山梨酯80或卵磷脂稀释液的容器中，振荡至少30分钟。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。---时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

操作注意事项

1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。

2.为防止---增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在 1 小时内操作完毕。

3.为检查和控制灭菌效果，应---白对照，以检验所使用的物品是否灭菌及检验过程是否无菌操作。

4.为便于区别---中的颗粒与菌落，可在每 100ml 营养琼脂中加入 1ml0.5 ％的ttc 溶液，如有---存在，培养后菌落呈红色，而---的颗粒颜色无变化。

培养基适用性检查

微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述，下文还有，不再赘述。

计数方法适用性试验

供试液制备

根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°c。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

学习：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。“供试液制备”这一节，水溶性供试品、水不溶性非油脂供试品、油脂类供试品的制备方法无变化。液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。在2020版药典中，将原“(4)需用特殊方法制备供试液的供试品”中的小类四种提升至与上述3类并列表述，除气雾剂供试品外，制备方法无变化。具体是膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂供试品2015版：气雾剂、---供试品、贴剂、贴膏剂供试品2015版：贴膏剂供试品。

供试品中微生物的回收

……涂布法“取15~20ml”修订为“取适量通常为15~20ml”。……(2)薄膜过滤法薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45jltm，直径一般为50mm,若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。需氧培养是指必须在有氧环境中进行培养，---时用振荡或通气搅拌达到充分供氧。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应---滤膜在过滤前后的完整性。

学习：这个“完整性”应该类似生产过程所用的滤膜的完整性，不同的是“---”的方法是滤器验收、厂家报告单、使用中外观检查等；---时应该进行适当方式的完整性检测。