湖南空气微生物限度检查周期信息「世纪久海」

{微生物检测}微生物接种

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

接种和分离工具

1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀

常用的接种方法有以下几种：

1、划线接种

这是zui常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

2、三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

3、穿刺接种

在保藏yanyang junzhong或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。2、液体石蜡法指将junzhong接种在适宜的斜面培养基上，适条件下培养好后注入灭的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温(4～6℃)干燥处进行保存的一种保藏方法。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的junzhong，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某---具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

穿刺接种的两种方法：垂直法和水平法

---效力-培养基

培养基的制备

1.胰酪大豆胨液体培养基

 胰酪胨17.0克

---5.0克

大豆木瓜蛋白酶---物3.0克

磷---二钾2.5克

---一水合2.5克

水1000ml

除---外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节 ph 值使灭菌后在 25℃的 ph 值为 7.3±0.2，加入---，分装，灭菌。

胰酪大豆胨液体培养基置 20～25℃培养。

2. 胰酪大豆胨琼脂培养基

胰酪胨15.0克

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克

琼脂15.0克

水1000ml

除琼脂外，取上述成分，混合。微温溶解，调节 ph 值使灭菌后在 25℃的 ph 值为 7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。

3.沙氏---液体培养基

沙氏---琼脂培养基照微生物限度检查法附录ⅹⅲ c制备。

微生物计数

1.血细胞计数法

将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的---数，并求出每个小格所含---的平均数，再以此为依据，估算总菌数。

此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

对压在小方格界线上的---，应当取平均值计数。

此法可用于测定培养液中酵母jun种群数量的变化

2.稀释涂布平板法

原理:每个活---在适宜的培养基和---的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

这一方法常用来统计样品中活菌的数目

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含---、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线jun或丝状---或丝状蓝---等的营养体等。

此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使---染成蓝色，可分别计数---和huo细胞。

微生物限度检查

   2薄膜过滤法 薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。3、v-p试验某些---在---蛋白胨水培养基中能分解---产生---，---缩合，脱羧成---，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二---，二---与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。使用时，应---滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的da过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

   取照上述“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液适量一般取相当于1g、1ml或10c㎡的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量，加至适量的稀释液中，混匀，过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。

   若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏---琼脂培养基平板上。按表1规定条件培养、计数。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微zhen、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。