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如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增试剂溶解剂等。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比pcr复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
lamp相关酶环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, lamp)所用酶主要为具有链置换功能的dna聚合酶,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为bst dna聚合酶,用于dna链合成,同时具有链置换功能;若检测模板为rna,则可加入逆转录酶配制成rt-lamp反应体系。
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