---性酶切分析法
---性酶切分析法是指基因组或一段---用---性内切酶---产生的片段经电泳等方法分离形成---的条带图谱，对dna序列的特征进行的分析。---性酶是生物体内能识别并切割特异的双链dna序列的一种内切---酶。它是可以将外来的dna切断的酶，即能够---异源dna的侵入并使之失去活力，但对自己的dna却无损害作用。
---酶是基因工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种---酶，并且已经商品化，在基因工程中广泛使用。根据---酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特---的；另一类是可特---地识别核苷酸序列，即只能在一定的dna序列上进行切割。
dna部分片段的连接
dna部分片段通过用每一种---性内切酶过量---底物dna而获得。这些片段随后用t4 dna连接酶连接( 5′末端浓度为0.1-1.0 μm)。连接的片段然后用同一种---性内切酶重切。仅当3′和 5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全恢复的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和 5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到---外切酶和磷酸酶。
质粒载体和外源ｄｎａ中---酶切位点的性质
如今，质粒载体中---酶切位点的种类---繁多，因而通常都有可能找到某种带---酶切位点恰恰与外源ｄｎａ部分片段本身-二致的载体。这就具备一个不可1比拟的优点，也应是可以用相应的---酶---重组质粒崦回收外源ｄｎａ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的---酶bamhl和bglⅱ产生具有相同---末端的---酶切片段，快切酶，这样用bglⅱ---而制备的外源ｄｎａ部分片段可以克1隆到用banhl---的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源ｄｎａ或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下，用切点位于多克1隆序列侧翼的---酶进行---，可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源ｄｎａ两端的---酶切位点之间，不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决：
1在线状质粒末端和或外源ｄｎａ部分片段的末端接上合成在接头或衔接头。
2在得到控制的反应条件下，用大肠杆1菌ｄｎａ聚合酶i ｋlenow片段部分补平带3凹端的ｄｎａ部分片段。如第九章所讨论，这样常可以使那些不相匹配的---酶切位点转变为互补末端，从而促进载体和外源ｄｎａ的连接。因为部分补平的反应消除了同一分子两端彼此配对的能力，故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低
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