hot start pcr的原理
hot start pcr法是提高pcr特---的重要方法之一。这种方法可以防止在pcr反应第yi步骤因引物的错配或引物二聚体的形成而导致的非特---扩增，从而可以提高目的dna部分片段的扩增效率。takara taq hot start version，takara ex taq hot start version，takara la taq hot start version，primestar hs dna polymerase，mightyamp dna polymerase是抗1体和dna聚合酶的混合制品。抗1体在高温加热前与聚合酶相结合，抑制聚合酶的活性。在pcr反应zui初的dna变性步骤，抗1体变性，gdna去除反转录试剂盒，聚合酶活性恢复。
污染的监测
一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。
1、阳性对照：在建立pcr反应实验室及一般的检验单位都应设有pcr阳性对照，它是pcr反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高100个拷贝以下。但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一pcr试剂经自己使用稳定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照。
2、阴性对照：每次pcr实验务必做阴性对照。它包括：
1标本对照：被检的标本是血1清就用鉴定后的正常血1清作对照；被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照。
2试剂对照：在pcr试剂中不加模板dna或rna，进行pcr扩增，以监测试剂是否污染。
3、重复性试验。
4、选择不同区域的引物进行pcr扩增。
基因分型
pcr可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如，基因敲除和敲入小鼠等生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼，可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。
但是如果为了检测特定核苷酸突变，则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如， pcr扩增子测序就是研究单核苷酸变异snvs和单核苷酸多态性snp的方法之一。---使用高保真dna聚合酶，以防止在pcr过程中引入多余的突变。
通过pcr进行基因分型也是对癌1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。
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