原理
原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的-复性结合而使得组织细胞中的特--得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在-的原有位置上显示出来。
经特定标记的核苷酸链为探针,植物rna原位杂交技术服务,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检dn-段或mrna进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检-的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mrna在胞质中的表达。
水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达,但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明,mads29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人-明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。
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