MRNA切割酶-友名生物公司(图)

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-性酶切分析法

-性酶切分析法是指基因组或一段-用-性内切酶-产生的片段经电泳等方法分离形成-的条带图谱,对dna序列的特征进行的分析。-性酶是生物体内能识别并切割特异的双链dna序列的一种内切-酶。它是可以将外来的dna切断的酶,即能够-异源dna的侵入并使之失去活力,但对自己的dna却无损害作用。

-酶是基因工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种-酶,mrna切割酶,并且已经商品化,在基因工程中广泛使用。根据-酶切割的特点,可将它们分为两大类:一类是切割部位无特-的;另一类是可特-地识别核苷酸序列,即只能在一定的dna序列上进行切割。



  非特-内切酶鉴定

  为鉴定非特-内切酶污染,-性内切酶与缺少该酶识别序列的超螺旋dna底物温育。对于rf i型dna(超螺旋形式),一个单一的非特-缺口就会将它转变成rf ii型dna(带缺口环状)。小份的-性内切酶与1μgdna在50μl反应体系中,采用的nebuffer,在的温度下温育4小时。两种形式的dna在琼脂糖凝胶上很容易区分,可以计算出从rf i 到 rf ii的转化率。




根据-酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将-酶分为三种类型,分别是第yi型type i、第二型type ii及第三型type iii。  

第yi型-酶同时具有修饰(modification)及认知切割(restriction)的作用;另有认知(recognize)dna上特定碱基序列的能力,通常其切割位(cleavage site)距离认知位(recognition)可达数千个碱基之远。例如:ecob、ecok。  

第二型-酶只具有认知切割的作用,修饰作用由其他酵素进行。所认知的位置多为短的回文序列(palindrome sequence);所剪切的碱基序列通常即为所认知的序列。是遗传工程上,实用性较高的-酶种类。例如:ecori、hindiii。  

第三型-酶与第yi型-酶类似,同时具有修饰及认知切割的作用。可认知短的不对称序列,切割位与认知序列约距24-26个碱基对。例如:ecopi、hinfiii。




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