细胞系常用解决方案「多图」

自噬(autophagy)是细胞受到---后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白---物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、

---和---等。单丹---尸胺(dansylcadaverine,mdc是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被于检测自噬体形成的特---标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2。leagene mdc染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与eb合用双染。

大鼠gu髓间充质gan细胞的分离

操作方法

(1 )取sd大鼠( 2周龄)，颈椎脱臼法处死后立即用75%---浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。

(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉, pbs溶液冲洗两遍。

(3 )从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取dmem/f 12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用pbs重悬细胞。

(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5ml淋巴细胞分离液的15ml离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面,保持二者分层界面。

(5 ) 2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状)， pbs洗三次。

(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的dmem/f 12以106/ml的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中， 置37°c、5%co2恒温培养箱中培养。

( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况)，pbs冲洗2-3次去除末贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次，-般10d细胞生长融合。

(8 )经0.25%胰酶---，1 : 2传代，其后一般3-5d传代1次,选取生长---的第三代细胞进行后续实验。

细胞培养中常见的污染及解决方法

---污染

---污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。，一些---类似于---碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像---那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。

解决方法：一旦被---污染，果断丢弃，然后对细胞房、co2 培养箱、器皿和培养基进行---消毒。