重庆酶联ELISA试剂盒公司择优,中检维康技术有限公司

elisa试剂盒的测试要求

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以---实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特---反应。

实验条件的选择

在elisa中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

1固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙---和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否---。

2包被或抗原的选择：将或抗原吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求ph在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度0.1、1.0和10μg/ml等进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的od值。选择od值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

3酶标记工作浓度的选择：首先用直接elisa法进行初步效价的滴定见酶标记部份。然后再固定其它条件或采取“方阵法”包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

4酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是---、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体如opd等有潜在的---作用，应注意防护。有条件者应使用不---、灵敏度高的供氢体，如tmb和abts是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是h2o2在临用前加入。

elisa试剂盒实验原理

将目标包被于微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生物化的目标，将未结合的生物素洗净后，加入hrp标记和亲和素，再次---洗涤后加入tmb底物显色。tmb在---化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度o.d.值，计算样品浓度。

elisa试剂盒——elisa实验常见问题及解决方案

显色淡，灵敏度偏低

1  试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，---所有试剂已平衡至室温约25℃

2  样品不适合做elisa检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做elisa检测或者需要优化检测的条件例如稀释液的成分

3  酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥

4  包被遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底

5  样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。

6  洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；

7  偶联hrp试剂污染 弃去试剂，重新配置

8  错误的稀释偶联hrp试剂 弃去试剂，重新配置

9  tmb底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；s4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定od值达到0.6-0.65

10  样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。

11  滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12  酶标板不适合做elisa 不能使用细胞培养板，建议使用elisa高吸附力板子。

背景深，全部呈有色通常的elisa背景值od<0.2 

1  洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，---拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

2  底物污染，未避光保存，出现颜色 弃去底物，重新配置

3  样品稀释液污染 弃去稀释液，重新配置

4  吸头重复使用，未洗净或消毒不--- 吸头尽可能---使用

5  不正确的孵育时间，温度尤其是底物孵育的时间 常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求。

6  偶联抗体streptavidin-hrp浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度

7  elisa板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的elisa板

8  没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

9  样本溶血--- 建议使用非溶血或轻微溶血样本，---溶血样本会导致背景偏高。