支原体检测在线咨询 友名生物技术

人elisa试剂盒的原理及优势：

　　1、elisa是以immune学反应为基础，将抗原、antibody的特---反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏感性---的试验技术。

　　2、由于抗原、antibody的反应在一种固相载体──聚---乙1烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而---试验结果的特---与稳定性。

　　3、elisa生物试验是一种敏感性高，特---强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在immune学检验的各领域中。

　　4、elisa检测试剂盒适用于体外定性检测人血1清或血浆中的抗人类hev---mantibody elisa检测。

　　5、elisa的基础是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或antibody仍保持其immune学活性，酶标记的抗原或antibody既保留其immune学活性，又保留酶的活性。

trna二级结构

约50%碱基配对，形成四段双螺旋，与五段非配对序列形成三叶草形结构。

该结构中存在四臂四环：

---酸臂。 

二氢尿c4h4n2臂dhu臂、d臂和二氢尿c4h4n2环dhu环、d环，特征是含二氢尿c4h4n2dhu、d。 

反密码子臂和反密码子环，特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接，3′端与piao呤核苷酸连接。tψc臂t臂和tψc环ψ环，特征是tψc环含胸腺c4h4n2核糖核苷酸t54假尿苷酸ψ55胞苷酸c56。

额外环3~21nt。

trna三级结构呈l形，---酸结合位点位于其一端，反密码子环位于其另一端，dhu环和tψc环虽然在二级结构中位于两侧，但在三级结构中却相邻。尽管各种trna的长度和序列不尽相同，但其三级结构相似，提示三级结构与其功能密切相关。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测dna在od260处有明显吸收峰，当od260=1时，相当于大约50 ng/μl双链dna、40 ng/μl单链dna。od260/od280≈1.6~1.9时，说明dna纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.sybr法检测取回收产物1 μl，与1 μl sybr染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μl，与10×loading buffer混匀，dna marker加5 μl，电泳后凝胶成像观察。5 μl dna marker相当于每个条带50 ng dna，观察目的条带亮度大致为marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μl。

棉花等酚类、多糖类物质较多的植物ｄｎａ提取法：

1 取2ｇ新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后快速、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ｍｌ离心管中。

2 在50ｍｌ离心管中加入10ｍｌ冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。

3 于4℃,2700×ｇ离心20分钟,倒去上清液。

4 在沉淀中加入5ｍｌ裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀。

5 于65℃水浴锅中温育30ｍｉｎ。

6 加入5ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。

7 于4℃,2700×ｇ离心5分钟。

8 转移上层水相至一新的50ｍｌ离心管中。

9 重复步骤7-9一次。

10 加入2/3体积的冰预冷的---1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2ｈ。

11 于4℃,1200×ｇ离心10ｍｉｎ。

12 在一新管中加入20ｍｌ含80%---15ｍｍｏｌ/ｌｎａａｃ溶液,用玻棒将ｄｎａ转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ｍｌ含80%---15ｍｍｏｌ/ｌｎａａｃ溶液),放置20ｍｉｎ后稍许离心,移走上清并吸出残存---,室温干燥。

13 加入1 0ｍｌｔｅ(10ｍｍｏｌ/ｌｔｒｉｓ-ｈｃｌｐｈ=8 0,1ｍｍｏｌ/ｌｅｄｔａ)并加入终浓度为20(ｇ/ｌ的ｒｎａｓｅａ,过夜。

14 风干,用50μｌｔｅ缓冲液溶解,存于-20℃备用。