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原位杂交公司电话 武汉思特进科技公司

发布者:武汉思特进科技发展有限公司  时间:2021-7-25 






原位杂交是指将特定标记的已知顺序-为探针与细胞或组织切片中-进行杂交,从而对特定-顺序进行精3确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交技术(in situ hybridization,ish)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。

原位pcr;原位杂交细胞定位和pcr的高灵敏度相结合的技术,在细胞爬片、甩片或涂片或组织石蜡、冰冻切片上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。



原位杂交;原位杂交in situ hybridization将标记的-探针与细胞或组织中的-进行杂交,称为原位杂交!

使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落100-200进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。




原位杂交中探针的选择

dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短,因此避免了探针内部退火的问题,在杂交时的渗透能力也---,探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度,通常300-1000bp左右,能覆盖到较长片段的靶-序列,增加检测的灵敏度。







在条件都得到满足的情况下,杂交的成败就取决于保温时间。时间短了,杂交反应不完成;时间长了也无益,会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年britten和kohne用cot =值来计算杂交反应时间。cot 值实际上是杂交液中单链起始浓度co和 反应时间t的乘积。实验表明cot =100时,杂交反应基本完成。cot=0,基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的dna 400μg/ml按单股dna每微克 紫外吸收值为0.024计算,总的吸收值为 9.6,如果反应时间为21h,那么对于未标记的dna来说,cot =9.6/21 =100.8,,杂交完成了。对标记dn a浓度为0.1μg/ml来说cot值为0.05,这就充分排除了标记dna的自我复性。tm值25℃时杂交zui佳,所以首先要根据公式4计算杂交体tm 值。由此式可见,通过调节盐浓度、---胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。




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