G蛋白活性检测试剂盒在线咨询「多图」

1.-的和非-的细胞裂解液

2.蛋白酶抑l制剂

3. 4°c管摇杆或摇床

4. 0.5 m edta，ph8.0

5. 1 m氯-

6. 2倍还原sds-page样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如tbst10 mm tris-hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05％

吐温20

9.免l疫印迹封闭缓冲液tbst包含5％脱脂奶粉或3％bsa

10. pvdf或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ecl检测试剂

储存条件

试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°c条件下保存。

试剂试剂盒内不提供，由实验者自行配置

1.  -和未-的细胞裂解物；

2.  蛋白酶抑制l剂；

3.  4 °c 摇杆或者摇床；

4.  0.5 m edta (ph 8.0)；

5.  1 m mgcl2；

6.  2x reducing sds-page sample buffer；

7.  电泳和免l疫印迹相关试剂；

8.  免l疫印迹缓冲液tbst (10 mm tris-hcl, ph 7.4, 0.15 m nacl, 0.05%

tween-20)；

9.  免l疫印迹封闭缓冲液 (tbst containing 5% 脱脂奶粉/3% bsa)；

10. pvdf或硝l酸纤维素膜；

11.  二抗；

12.  ecl 检测试剂；

电泳和转膜

1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。

2. 按照制造商的说明进行sds-page。

3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到pvdf或硝化纤l维素膜。

免l疫印迹反应和检测所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌

1. 将pvdf膜浸入100%甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。

2. 封闭：用tbst缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%bsa在室温下孵育1h进行封闭，并需要恒定振荡。

3. 孵育一抗：用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa稀释特-识别cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的cdc42蛋白的量，室温下孵育1-2小时，或者4°c条件下过夜孵育。

4. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

5. 孵育二抗：例如羊抗兔igg-hrp，用tbst缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%bsa按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。

6. 用tbst缓冲液洗涤膜三次/5min。

7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ecl显色法。

分析原理

neweast biosciences arl1激l活检测试剂盒基于配置特-抗arl1-gtp从细胞提取物或体外检测活性arl1-gtp水平的单克l隆抗l体gtpγs负载arl1活化分析。简而言之，抗活性arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有arl1-gtp的细胞裂解液培养。然后，绑定的活动arl1将被下拉蛋白质a/g琼脂糖。用抗arl1兔多克l隆抗l体或抗arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析，检测沉淀的活性arl1。

需要但未提供的材料

1-性和非-性细胞裂解物

2蛋白酶抑制素

4°c摇管器或振动筛

40.5 m edta，ph8.0

51百万氯-

62x还原sds-page样品缓冲液

7电泳和免l疫印迹系统

8免l疫印迹洗涤缓冲液，如tbst10 mm tris hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05%

吐温-20

9免l疫印迹阻断缓冲液含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的tbst

10pvdf或硝化纤维膜

11次级抗l体

12ecl检测试剂