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在选用支原体pcr法检测来替代药典方法时，需要考虑如下两个方面：

首先一步是要使用符合欧洲药典要求，经过全方面验证的支原体检测试剂盒，第二部是自我验证，即确认所用的样本基质对于该试剂盒方法是合适的，并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的试剂盒，然后加入10cfu的标准品，做复孔通常是8个复孔，并且至少选择3个支原体物种进行验证。

有的支原体标准品厂家会提供cfu与基因拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10cfu只能确定pcr能够达到的检测限在10cfu以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带dna拷贝数标定的基因组dna标准品则可进一步确定检测限的数值。

总之，pcr方法很有用，但需要避免假阴性，验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照，以---pcr反应正常，以及支原体少量存在时确实能检出来，支原体不存在时也---是结果阴性，从而使得pcr方法在工业应用时能---zui终结果的---。

dna提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组dna的试剂盒。氯化1苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的------化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化1苄的这一特性，将植物样品---融解后，再使用pipet tip的尖1端将植物样品在microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于---处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组dna可以进行pcr扩增及---酶处理等。

dna提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组dna提取试剂盒、中量全血基因组dna提取试剂盒、组织/细胞基因组dna提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组dna提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组dna提取试剂盒、ctab植物基因dna提取试剂盒、新型植物基因组dna提取试剂盒、酵母基因组dna提取试剂盒、m13噬菌体单链基因组dna提取试剂盒。

如何确认rna的

实时荧光定量pcr技术是通过测定rna的转录水平来评估基因的活力。rna样本提取的直接影响基因表达分析。影响rna品质的因素有以下三种：rna浓度、rna纯度和rna完整性。

检测rna浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种：

紫外分光光度计法：

测量260nm吸收值计算rna浓度，测量260nm/280nm吸收值的比值，用于评估rna纯度。需要注意的是：在检测-物质时应该在固定的ph溶液中进行。

260nm/280nm的比值范围在 1.9~2.1 之间。＜1.9，说明有蛋白质残留；＞2.1，说明rna可能发生降解。

琼脂糖凝胶电泳：

完整的rna通常有三条带，zui亮的是28s条带，其次是18s条带，zui淡的是5s条带部分试剂盒提取时会过滤掉5s条带。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28s和18s的比值。该方法主要用于检测rna的纯度和完整性。

如果28s和18s条带明亮、清晰、条带锐利，28s的亮度在18s条带的两倍以上，我们认为rna的zui好。

若rna条带出现弥散，原因可能：rna被-酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。

----提取就像针尖上跳舞

检验的首要一步是----提取，这也是zui危险的一步，需要在专门的生物安全二级实验室里进行。检测人员要在清洁区穿戴两套防护服、两副乳胶手套，戴护目镜，穿靴套，前后穿过6道门，才能到达---实验区，----提取就像是“针尖上的舞蹈”。“每次脱下防护服，衣服都湿透了。在2—4个小时的----提取实验过程中，一般都会安排两人一组进行检验，既是规定要求，也是防止工作人员在密闭的负压实验空间里出现意外。