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细胞培养中常见的污染及解决方法

黑点污染

黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长---，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。有时为了进一步-生产或进行人源化等生物工程操作/修饰，有---了解杂交瘤所表达的对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。

解决方法：黑点对细胞生长状态没有明显影响，---后会自然消失，因此除了置换外，无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染，建议增加培养皿细胞密度，以提高细胞存活率。

q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？

a:1细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。

2过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。一般说来，因为在生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不再过滤用于细胞培养 的。2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经facs分选后获得细胞纯度。在实验室中没有---再过滤处理，在-的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起 过滤。

3污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的 沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状 沉淀，因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点，因此就确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。细胞生物学服务南京英瀚斯生物科技公司自建有标准的细胞培养房，配备有生物安全柜、超净工作台、细胞三气培养箱、---细胞培养箱、荧光倒置显微镜、体视镜、、流式细胞仪等设备。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在 培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有---生长。另外，也可以进 行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。

q:如何避免中沉淀物的出现？

a:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：

1热灭活；

2在 37℃ 下培养；

3反复冻融；

4γ 射线照射；

5长期储存在 2-8℃；

6在室温下放置时间过长

q:如何去除中的沉淀？

a:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以  400g  离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。