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GISH电话「思特进」
多彩色荧光原位杂交技术多彩色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization，mfish)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。它克服了fish技术的局限，能同时检测多个基因，在检测遗传物质的突变和染色体上基因定位等方面得到了广泛的应用(杨明杰等1998)。
原位杂交中探针的选择
dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也---，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶-序列，增加检测的灵敏度。
使用分支dna信号扩增的rna fish
invitrogen? viewrna?和primeflow?检测是使用分支dna信号扩增 (bdna) 来检测特---信号的直接荧光rna ish方法。 使用独立但兼容的信号扩增系统让rna靶标的多重复用成为可能。 荧光rna原位杂交检测分为四个主要步骤：样本制备、靶标杂交、信号扩增以及检测。 该方法可实现更高的特---，---的背景值和更高的信噪比。
杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度低于tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低tm-30℃，虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或---些的dna，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
zui适复性温度optimunm renaturation temperature, tor：tor =tm –25℃
苛刻复性温度：ts = tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度：tns =tm – (30或35℃)
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