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随着基因组测序、分子生物学检测手段的快速发展，pcr和荧光定量pcr实验，正在越来越多的实验室应用。然而，pcr作为一种高灵敏度的检测手段，pcr的实验结果也容易被各种无关的外源性dna或rna所干扰。

pcr实验室中，很容易发生dna的交叉污染，污染通常来自于离心管、移液器和其他试验设备产生的dna气溶胶，或dna溶液污染桌面，或吸样枪不慎将样品或模板-吸入枪内。据估算，一个气溶胶颗粒可含48000个dna拷贝。 因此，为-pcr试验的数据准确，避免交叉污染，应定期对pcr实验室做dna污染情况的监测。

总rna的抽提方法:

目前常用的方法是用异硫qing酸胍-1酚抽提法。

提取步骤:

先用液氮研磨材料，匀浆，加入trizol试剂，进一步破碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提，离心，分离水相和有机相，收集含有rna的水相，通过-1醇沉淀，获得比较纯的总rna,用于下一步mrna的纯化。也可将含有rna样品的细胞破碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。

rna浓度和纯度判断:

od260为1时相当于浓度为50 ug/ml;

od260/0d280值在1.8~ 2.0之间，表示纯度较好;

0d260/od280值低于1.8，样品有蛋白质或酚污染;

0d260/0d280值大于2.0，提取的rna可能有降解;

电泳后如果rrna大小完整，而且28s rrna和18srrna亮度接近2:1、mrna分布均匀，则认为rna。

pcr产物的回收胶回收试剂盒

1.胶回收的目的1去除非特-扩增的产物2去除多余的底物3去除多余的taq酶4得到目的片段

2.胶回收的过程1切胶：紫外下切胶，称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用-刀片，实验台等也尽可能用-擦拭干净。可通过空ep管与装胶ep管的差值计算胶的。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶，且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度，前后多余的部分也尽量切除。2溶胶：每1 mg胶加入1 μl膜结合液mb，按比例1:1加入mb，55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，-胶块完全溶解。在电泳过程中，dna会与大分子的多糖紧密结合，凝胶的种类和不同，dna与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解dna才能充分释放。否则，凝胶将与dna一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。3结合：将溶胶转移至纯化柱内，12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在温度较高时结合dna的能力较弱。

为什么用无水-沉淀dna

　　用无水-沉淀dna，这是实验中较常用的沉淀dna的方法。-的优点是可以任意比和水相混溶， -与-不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。

　　dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入-时，-会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水-与dna相混合，其-的zui终含量占67%左右。 因而也可改用95%-来替代无水-(因为无水-的价格远远比95%-昂贵)。

　　但是加95%的-使总体积增大，而dna在溶液中有一定程度的溶解，因而dna损失也增大， 尤其用多次-沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀dna时可用95%-代替无水乙酵， 后面的沉淀步骤要使用无水-。也可以用0.6倍体积的-1醇选择性沉淀dna。一般在室温下放置15-30分钟即可。