北京微生物检测中心-「世纪久海」

{微生物}培养

——微生物培养——

指将微生物接种到培养基内，经一定条件使微生物生长繁殖。包括生产型食品微生物(-，酵母菌等)和是食物变质(霉菌，-等)和食源病原微生物(大肠菌，肉毒菌等)。接种的方法有 6种。涂布法:将纯菌或含菌材料均匀地涂布在固体培养基表面。划线法:用接种环沾取含菌材料，在固体培养基表面划线。倾注法:取少许含菌材料放入无菌培养皿中，然后倾入已融化并已冷却至48℃左右的琼脂灭菌培养基，摇匀后冷却凝固。点植法:用接种针在固体培养基表面接触几点。穿刺法:用接种针沾取的微生物经穿刺而进入半固体深层培养基中。浸洗法:用接种针挑取含菌材料，在液体培养基中洗下。培养方法则根据微生物对氧的要求情况分为需氧和厌氧两种。需氧培养是指必须在有氧环境中进行培养，-时用振荡或通气搅拌达到充分供氧;厌氧培养是培养过程一直保持在少氧或无氧的环境中。厌氧的方法可用物理、化学、生物等办法使培养容器内的氧气部分或全部消除。通常用抽真空方法，有时将两种方法结合使用，使厌氧培养更为理想。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中基本和必不可少的方法。

微生物限度检查

计数方法

   计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和可能数法most-probable-number method，简称mpn法。mpn 法用于微生物计数时jing确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，mpn法可能是更适合的方法。

   供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能-所获得的试验结果能够判-试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。

   计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验

   供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

   供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

   若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

   2薄膜过滤法 薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。4、浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应-滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的da过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

   取照上述“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液适量一般取相当于1g、1ml或10c㎡的供试品，若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量，加至适量的稀释液中，混匀，过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。

   若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏-琼脂培养基平板上。在我国现有的-中，致病菌一般指肠道致病菌和致病性球菌，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄qiu菌、致病性链球菌等四种，致病菌不允许在食品中检出。按表1规定条件培养、计数。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。