流式细胞技术细胞分离培养「英瀚斯」

骨sui内皮祖细胞的分离培养

方法:使用密度梯度离

心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用dil标记的---化低密度脂蛋白和fitc标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原cd34、cd133 表达情况.结果与结论:培养前4 d---不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬dil标记的---化低密度脂蛋白和fitc标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,cd133+细胞占19.2%,cd34+细胞占28.7%,cd34+ /cd133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

4.  各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分钟合适；胚胎细胞耐受性较小，不宜太快。总之在一开始时，下降速度不能超过－10℃/ 分钟。

5.  用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用 dmso 较好，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中---。

6.  原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。

7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免

8. 注意自身的安全，对于来自人源性或---的细胞株应---小心。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心有毒性试剂例如 dmso，并避免尖锐物品-等。