反转录预混液服务为先 武汉友名生物
出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行pcr扩增时,扩增出的pcr产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。
靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决:操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样内或溅出离心管外。除酶及不---高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进头等均应---使用。---时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的-。二是空气中的小片段-污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接,与引物互补后,可扩增出pcr产物,而导致假阳性的产生,可用巢式pcr方法来减轻或消除。
基因表达
通常可通过pcr来检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的基因表达差异。首先,从目标样品中分离出rna并将mrna逆转录成cdna。随后,通过由pcr扩增的cdna数量,确定mrna的初始水平。这一过程也被称为逆转录pcr。
终点pcr 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对rna的表达进行定量一种半定量方法。例如,对起始cdna进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点pcr得率可视化,然后对条带强度进行定量,并以管家基因为参照进行标准化,预估扩增靶点的相对表达水平。如今,终点pcr已基本被实时pcr 或qpcr 取代了,因为它们可获得和的基因表达定量结果。
普通的pcr仪
把一次pcr扩增只能运行一个特定退火温度的pcr仪,叫传统的pcr仪,也叫普通pcr仪。
它是由主机,加热模块,pcr管,热盖,控制软件组成。根据dna部分片段高温解链,降温配对聚合原理,通过循环改变加热模块的温度,微量不易于分辨的的dna部分片段进行扩增成大量的dna部分片段,从而对其进行分析鉴定。根据需要可结合电泳仪,水平电泳槽,一起应用。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要是做简单的,对目的基因退火温度的扩增。
该仪器主要应用于医学---检验,食品检测,科研机构,---院校教学对遗传变异,基因表达等进行研究。
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