RHEB 蛋白- 武汉纽斯特生物

1.---的和非---的细胞裂解液

2.蛋白酶抑l制剂

3. 4°c管摇杆或摇床

4. 0.5 m edta，ph8.0

5. 1 m氯---

6. 2倍还原sds-page样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如tbst10 mm tris-hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05％

吐温20

9.免l疫印迹封闭缓冲液tbst包含5％脱脂奶粉或3％bsa

10. pvdf或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ecl检测试剂

阳性对照和阴性对照的体外gtpγs/ gdp蛋白质上样量

注意：体内细胞---将激l活可用arf 6的大约10％，而体外gtpγs蛋白负载将激l活arf 6的将近90％。

1，将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中或使用1 μg纯化的arf 6蛋白。

2，向每个试管中加入20 μl 0.5 m edta终浓度为20 mm。

3，将5 μl 100 xgtpγs至100 μm，终浓度加到一个试管中阳性对照。

4，在第二个试管中加入5 μl 100 x gdp至1 mm，终浓度阴性对照。

5，在搅拌下将试管在30°c孵育30分钟。

6，通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 m mgcl2至60 mm，终浓度来停止加载。

分析原理

基于构型特---抗gα13-gtp的neweast生物科学gα13活化检测试剂盒从细胞提取物或体外检测活性gα13-gtp水平的单克l隆抗l体gtpγs负载gα13活化试验。简单地说，抗活性gα13小鼠单克l隆抗l体用含有gα13-gtp的细胞裂解液培养。结合的活性gα13将被蛋白质a/g琼脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l体免l疫印迹法检测沉淀的活性gα13。