湖南基因编辑技术- 英瀚斯

mtt检测

mtt 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的-脱氢酶能使外源性 mtt 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒formazan并沉积在细胞中，而-无此功能。二jia基-dmso能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。-的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，终产生-蛋白质。

干细bao培养-分化

     干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞，理论上具有分裂能力，在特定条件下，可分化成特定组织。通常改变抑制 es 细胞不分化状态的培养条件, es 细胞就可以分化成多种细胞类型。es 细胞具有的这种能力在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性,使其广泛应用于生物学研究的各个领域, 它的潜在医学应用价值已成为范围内研究的-。目前，已-的自es细胞-分化的细胞主要包括胰岛细胞、造血细胞、肝细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软gu细胞和黑素细胞等。从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该，而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。

细胞培养中常见的污染及解决方法

霉菌污染

正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。

解决方法：用-铜溶液擦拭 co2 培养箱，向托盘中加入饱和-铜或消毒后加入饱和磷-二钠高盐溶液，避免霉菌污染。

如果霉菌污染，暂时转移所有细胞，并立即使用 guo 氧擦拭培养箱，包括层板和内壁。将 guo 氧放在培养箱中一小时，使蒸汽扩散，待 guo 氧气味消散后，将细胞转移到培养箱中。值得注意的是，培养箱需要每两个月定期清洗一次，尤其是在梅雨季节。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精连续擦拭培养箱，用紫外线照射也是一种有效的方法。g0/g1期：有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，进入下一个细胞周期，或者进入静止期g0期，而g0期从dna含量上无法与g1期区分，细胞开始rna和蛋白质的合成，但dna含量仍保持二倍体。

为防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 、抑制素、fang

线菌素 d 或青链。一旦被污染，就不可能恢复，即使使用上述，也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养，选择是丢弃污染的培养物，并用使用新鲜的无支原体的储存液，消毒环境。如果所有的细胞都被污染了，那可能是整个培养系统污染了。因此，必须对培养基和实验设备进行检查。与传统的2d贴壁细胞培养模型相比，3d多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。如果只是个别污染，可能是操作问题，有-注意实验操作步骤的规范。

4.  各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分钟合适；胚胎细胞耐受性较小，不宜太快。总之在一开始时，下降速度不能超过－10℃/ 分钟。

5.  用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用 dmso 较好，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中-。

6.  原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。

7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免

8. 注意自身的安全，对于来自人源性或-的细胞株应-小心。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心有毒性试剂例如 dmso，并避免尖锐物品-等。